Evaluación de la bioseguridad del protocolo de extracción de ADN para especies del complejo Mycobacterium tuberculosis implementado en el Instituto Nacional de Salud

  • Wellman Ribón Grupo de Micobacterias, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia. Centro Colombiano de Investigación en Tuberculosis-CCITB, Bogotá D.C., Colombia. Escuela de Bacteriología y Laboratorio Clínico, Universidad Industrial de Santander, Bucara
  • Claudia Castro Grupo de Micobacterias, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia. Centro Colombiano de Investigación en Tuberculosis-CCITB, Bogotá D.C., Colombia
  • Liliana González Grupo de Micobacterias, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia. Centro Colombiano de Investigación en Tuberculosis-CCITB, Bogotá D.C., Colombia. Maestría en Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bo
  • Juan Carlos Rozo Grupo de Micobacterias, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia. Centro Colombiano de Investigación en Tuberculosis-CCITB, Bogotá D.C., Colombia. Maestría en Biología Molecular y Biotecnología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad
  • Gloria Puerto Grupo de Micobacterias, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D.C., Colombia. Centro Colombiano de Investigación en Tuberculosis-CCITB, Bogotá D.C., Colombia
Palabras clave: Mycobacterium tuberculosis, exposición a agentes biológicos, ADN, técnicas y procedimientos de laboratorio.

Resumen

Introducción. El trabajo con Mycobacterium tuberculosis se considera un factor de riesgo para el personal de laboratorio que manipula especímenes clínicos y cultivos. Uno de los procesos que requiere de una alta concentración de microorganismos es la extracción de ADN para realizar metodologías moleculares. Se han reportado casos de tuberculosis pulmonar en profesionales que realizan procedimientos moleculares en los que se requiere previa manipulación del microorganismo en masa, lo cual ha motivado la investigación sobre la bioseguridad del protocolo de extracción, sin que a la fecha haya consenso sobre los riesgos del proceso.
Objetivo. Evaluar la bioseguridad del protocolo de extracción de ADN reportado por van Soolingen et al., 2002, mediante la determinación de la viabilidad de M. tuberculosis en cada etapa del proceso.
Materiales y métodos. Se realizaron 880 cultivos a partir de 220 aislamientos clínicos de M. tuberculosis que se procesaron para las tres primeras fases de extracción de ADN. A los cultivos positivos se les realizó identificación molecular por PRA hsp65 y caracterización por spoligotyping.
Resultados. Se obtuvo crecimiento en uno de los procedimientos realizados. Por caracterización molecular, se determinó que no correspondió al aislamiento analizado originalmente, sino que fue producto de contaminación cruzada.
Conclusión. Se determinó que el protocolo de extracción de ADN descrito por van Soolingen et al. (2002) e implementado en el Instituto Nacional de Salud de Colombia, es seguro para el personal de laboratorio y el medio ambiente.

Descargas

La descarga de datos todavía no está disponible.

Referencias

1. World Health Organization. Global tuberculosis control: Surveillance, lanning, nancing. WHO Report 2008 (WHO/HTM/TB/2008.393). Geneva: World Health Organization; 2008.
2. Bentwich Z, Maartens G, Torten D, Lal A, Lal R. Concurrent infections and HIV pathogenesis. AIDS. 2000;14:2071-81.
3. World Health Organization. Guidelines for the program-matic management of drug-resistant tuberculosis. WHO/HTM/TB/2006.361. Geneva: World Health Organization; 2006.
4. Broekmans J. Control strategies and programme management. In: Porter JD, McAdam PW, editors. Tuberculosis, back to the future. New York, N.Y: John Wiley & Sons Inc.; 1994. p. 171-92.
5. Supply P, Mazars E, Lesjean S, Vincent V, Gicquel B, Locht C. Variable human minisatellite-like regions in the Mycobacterium tuberculosis genome. Mol Microbiol. 2000;36:762-71.
6. Devallois A, Goh K, Rastogi N. Rapid identification of mycobacteria to species level by PCR-restriction fragment length polymorphism analysis of the hsp65 gene and proposition of an algorithm to differentiate 34 myco-bacterial species. J Clin Microbiol. 1997;35:2969-73.
7. Van Embden J, Cave M, Crawford J, Dale J, Eisenach K, Gicquel B. Strain identification of Mycobacterium tuberculosis by DNA fingerprinting: Recommendations for a standardized methodology. J Clin Microbiol. 1993;31:406-9.
8. Kamerbeek J, Schouls L, Kolk A, van Agterveld M, van Soolingen D, Kuijper S, et al. Simultaneous detection and strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis and epidemiology. J Clin Microbiol. 1997;35:907-14.
9. Menzies D, Fanning A, Yuan L, Fitzgerald M. Tuberculosis among health care workers. N Engl J Med. 1995;332:92-8.
10. Bemer-Melchior P, Drugeon H. Inactivation of Mycobacterium tuberculosis for DNA typing analysis. J Clin Microbiol. 1999;37:2350-1.
11. Somerville W, Thibert L, Schwartzman K, Behr M. Extraction of Mycobacterium tuberculosis DNA: a question of containment. J Clin Microbiol. 2005;43:2996-7.
12. Van Soolingen D, Hermans P, de Haas P, Soll D, van Embden J. The occurrence and stability of insertion sequences in Mycobacterium tuberculosis complex strains: evaluation of an insertion sequence dependent DNA polymorphism as a tool in the epidemiology of tuberculosis. J Clin Microbiol. 1991;29:2578-86.
13. Van Soolingen D, de Hass P, Kremer K. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) typing of Mycobacteria. Bilthoven: National Institute of Public Health and the Environment; 2002.
14. Zwadyk P Jr, Down J, Myers N, Dey M. Rendering of mycobacteria safe for molecular diagnostic studies and development of a lysis method for strand displacement amplification and PCR. J Clin Microbiol. 1994;32:2140-6.
15. Collins C, Kennedy D. Laboratory-acquired infections: History, incidence, causes and prevention. 4th edition. Oxford: Butterworth-Heinemann; 1999.
16. Blackwood K, Burdz T, Turenne C, Sharma M, Kabani A, Wolfe J. Viability testing of material derived from Mycobacterium tuberculosis prior to removal from a containment level-III laboratory as a part of a laboratory risk assessment program. BMC Infect Dis. 2005;5:1-7.
17. Doig C, Seagar A, Watt B, Forbes K. The efficacy of the heat killing of Mycobacterium tuberculosis. J Clin Pathol. 2002;55:778-9.
18. Warren R, Kock M, Engelke E, Myburgh R, Van Pittius N, Victor T, et al. Safe Mycobacterium tuberculosis DNA extraction method that does not compromise integrity. J Clin Microbiol. 2006;44:254-6.
19. Djelouagji Z, Drancourt M. Inactivation of cultured Mycobacterium tuberculosis organisms prior to DNA extraction. J Clin Microbiol. 2006;44:1594-5.
20. Glynn J, Yates M, Crampin A. DNA fingerprint changes in tuberculosis: reinfection, evolution, or laboratory error? J Infect Dis. 2004;190:1158-66.
21. Small P, McClenny N, Singh S, Schoolnik G, Tompkins L, Mickelsen P. Molecular strain typing of Mycobacterium tuberculosis to confirm cross-contamination in the mycobacteriology laboratory and modification of procedures to minimize occurrence of false-positive cultures. J Clin Microbiol. 1993;31:1677-82.
22. Wurtz R, Demarais P, Trainor W. Specimen contamination in mycobacteriology laboratory detected by pseudo-outbreak of multidrug-resistant tuberculosis: analysis by routine epidemiology and confirmation by molecular technique. J Clin Microbiol. 1996;34:1017-9.
23. Burman W, Stone B, Reves R. The incidence of false-positive cultures for Mycobacterium tuberculosis. Am J Respir Crit Care Med. 1997;155:321-6.
24. Bhattacharya M, Dietrich S, Mosher L. Cross contamination of specimens with Mycobacterium tuberculosis: clinical significance, causes, and prevention. Am J Clin Pathol. 1998;109:324-30.
Publicado
2009-12-01
Cómo citar
Ribón, W., Castro, C., González, L., Rozo, J. C., & Puerto, G. (2009). Evaluación de la bioseguridad del protocolo de extracción de ADN para especies del complejo Mycobacterium tuberculosis implementado en el Instituto Nacional de Salud. Biomédica, 29(4), 561-6. https://doi.org/10.7705/biomedica.v29i4.133
Sección
Artículos originales