Clonación y expresión de un fragmento recombinante del gen cagA de Helicobacter pylori y su evaluación preliminar en el serodiagnóstico

  • Lidice González División de Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana, Cuba
  • Karen Marrero División de Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana, Cuba
  • Orlando Reyes División de Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana, Cuba
  • Elaine Rodríguez Centro de Estudios de Proteínas, Facultad de Biología, Universidad de La Habana, La Habana, Cuba
  • Liudmila Martínez Departamento de Gastroenterología, Hospital Carlos J. Finlay, La Habana, Cuba
  • Boris L. Rodríguez Centro de Estudios de Proteínas, Facultad de Biología, Universidad de La Habana, La Habana, Cubaa
Palabras clave: Helicobacter pylori, pruebas serológicas

Resumen

Introducción. Las cepas de Helicobacter pylori que expresan la citotoxina CagA, se asocian más frecuentemente con úlcera péptica, gastritis atrófica y adenocarcinoma gástrico que las que carecen de esta citotoxina. Por lo anterior, el determinar la presencia de anticuerpos anti-CagA adquiere gran importancia clínica en la detección serológica de la infección por H. pylori y la predicción del riesgo de enfermedades. Sin embargo, los métodos serológicos que emplean CagA han sido cuestionados debido a las diferencias encontradas en las evaluaciones de su desempeño en diversas poblaciones.

Objetivo. Obtener un fragmento recombinante de la proteína CagA para el serodiagnóstico de la infección por H. pylori.

Materiales y métodos. Un fragmento del gen cagA fue clonado en un vector de expresión procariota que contenía el promotor de la T7 ARN polimerasa. El fragmento de la proteína CagA con seis histidinas en la región C-terminal, se expresó, se solubilizó con urea y se purificó por cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados. El desempeño de la proteína recombinante se evaluó empleando
un método in house de Western Blot y 180 sueros humanos. Los resultados se compararon con la prueba de referencia Helicoblot 2.1. 

Resultados. La proteína CagA expresada mostró una banda inmunorreactiva de 80 kDa en el Western Blot al emplear dos anticuerpos policlonales anti-CagA específicos. La proteína recombinante fue purificada hasta un 93 % de pureza y el análisis de desempeño del antígeno recombinante purificado mostró buena inmunorreacción y exhibió valores de sensibilidad, especificidad y exactitud de 88,1 %,
100 % y 92,7 %, respectivamente.

Conclusiones. El fragmento de la proteína CagA del estudio puede constituir una herramienta útil para el diagnóstico serológico de la infección por cepas de H. pylori positivas para CagA.

doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1678

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Publicado
2013-12-01
Cómo citar
González, L., Marrero, K., Reyes, O., Rodríguez, E., Martínez, L., & Rodríguez, B. (2013). Clonación y expresión de un fragmento recombinante del gen cagA de Helicobacter pylori y su evaluación preliminar en el serodiagnóstico. Biomédica, 33(4), 546-53. https://doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1678
Sección
Artículos originales