Diagnóstico microscópico de neumonía por Pneumocystis jirovecii en muestras de lavado broncoalveolar y lavado orofaríngeo de pacientes inmunocomprometidos con neumonía

Jenniffer Rodiño, Nataly Rincón, Yudy Alexandra Aguilar, Zulma Vanessa Rueda, Mariana Herrera, Lázaro Agustín Vélez, .

Palabras clave: neumonía por Pneumocystis/diagnóstico, técnica del anticuerpo fluorescente directa, cloruro de tolonio, orofaringe, lavado broncoalveolar, huésped inmunocomprometido

Resumen

Introducción. El diagnóstico de neumonía por Pneumocystis jirovecii se fundamenta en la visualización microscópica del hongo en secreciones respiratorias. Técnicas moleculares recientes también lo han detectado en muestras de orofaringe, pero su utilidad diagnóstica es discutible. En Colombia, hay poca información al respecto.
Objetivo. Comparar el rendimiento de dos coloraciones, azul de toluidina O e inmunofluorescencia directa, en muestras de lavado broncoalveolar y lavado orofaríngeo en pacientes inmunocomprometidos con neumonía.
Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio transversal de evaluación de pruebas diagnósticas en 166 pacientes inmunocomprometidos con sospecha de neumonía por P. jirovecii. Por protocolo, las muestras de lavado broncoalveolar y orofaríngeo se citocentrifugaron y se colorearon con azul de toluidina e inmunofluorescencia. Se determinó la proporción de resultados positivos con ambas tinciones en cada una de las muestras, y la concordancia entre ellas.
Resultados. Se detectaron 24 casos de neumonía por P. jirovecii en las muestras de lavado broncoalveolar (14,5 %), 21 de los cuales fueron positivos por ambas pruebas, mientras que tres casos se detectaron sólo por inmunofluorescencia. Ninguna de las 166 muestras de lavado orofaríngeo fue positiva por cualquiera de estas técnicas. Al comparar las proporciones de resultados positivos, no se encontraron desacuerdos significativos (p=0,63). La concordancia (coeficiente kappa) entre ellas fue de 0,92 (IC95%: 0,84-1).
Conclusiones. Ambas coloraciones son útiles para diagnosticar neumonía por P. jirovecii en muestras de lavado broncoalveolar. Sin embargo, el azul de toluidina no detecta, aproximadamente, el 12 % de los casos positivos por inmunofluorescencia. Las muestras de lavado orofaríngeo no son apropiadas para detectar microscópicamente P. jirovecii.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.
  • Jenniffer Rodiño Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Grupo Investigador de Problemas en Enfermedades Infecciosas (GRIPE), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Nataly Rincón
  • Yudy Alexandra Aguilar Grupo Investigador de Problemas en Enfermedades Infecciosas (GRIPE), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Corporación de Ciencias Básicas Biomédicas, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Zulma Vanessa Rueda Grupo Investigador de Problemas en Enfermedades Infecciosas (GRIPE), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Facultad Nacional de Salud Pública, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Mariana Herrera Grupo Investigador de Problemas en Enfermedades Infecciosas (GRIPE), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Corporación de Ciencias Básicas Biomédicas, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Lázaro Agustín Vélez Grupo Investigador de Problemas en Enfermedades Infecciosas (GRIPE), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Sección de Enfermedades Infecciosas, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

Referencias bibliográficas

1. Morris A, Lundgren JD, Masur H, Walzer PD, Hanson DL, Frederick T, et al. Current epidemiology of Pneumocystis pneumonia. Emerg Infect Dis. 2004;10:1713-20.
2. Casanova K, Sáez A, Navas T, Vera R, Panizo M, Chiriboga D. Epidemiología de la neumocistosis. Medicina Interna (Caracas). 2006;22:207-26.
3. Benfield TL, Helweg-Larsen J, Bang D, Junge J, Lundgren JD. Prognostic markers of short-term mortality in AIDS-associated Pneumocystis carinii pneumonia. Chest. 2001;119:844-51.
4. Thomas CF Jr, Limper AH. Pneumocystis pneumonia. N Engl J Med. 2004;350:2487-98.
5. Vélez L, Correa LT, Maya MA, Mejía P, Ortega J, Bedoya V, et al. Diagnostic accuracy of bronchoalveolar lavage samples in immunosuppressed patients with suspected pneumonia: Analysis of a protocol. Respir Med. 2007;101:2160-7.
6. Walzer PD, Evans HE, Copas AJ, Edwards SG, Grant AD, Miller RF. Early predictors of mortality from Pneumocystis jirovecii pneumonia in HIV-infected patients: 1985-2006. Clin Infect Dis. 2008;46:625-33.
7. Pulvirenti J, Herrera P, Venkataraman P, Ahmed N. Pneumocystis carinii pneumonia in HIV-infected patients in the HAART era. AIDS Patient Care STDS. 2003;17:261-5.
8. Huang L. Clinical presentation and diagnosis of Pneumocystis pneumonia in HIV-infected patients. En: Walzer PD, Cushion MT, editors. Pneumocystis pneumonia. Third edition. New York: Marcel Dekke; 2005. p. 373.
9. Meyer KC. Bronchoalveolar lavage as a diagnostic tool. Semin Respir Crit Care Med. 2007;28:546-60.
10. Walser PD, Smulian AG. Pneumocystis Species. En: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R, editores. Principles and practice of infectious diseases. Seventh edition. Philadelphia, PA: Churchill Livingstone Elsevier; 2010. p. 3377-90.
11. Helweg-Larsen J, Jensen JS, Benfield T, Svendsen UG, Lundgren JD, Lundgren B. Diagnostic use of PCR for detection of Pneumocystis carinii in oral wash samples. J Clin Microbiol. 1998;36:2068-72.
12. Larsen HH, Huang L, Kovacs JA, Crothers K, Silcott VA, Morris A, et al. A prospective, blinded study of quantitative touch-down polymerase chain reaction using oral-wash samples for diagnosis of Pneumocystis pneumonia in HIV-infected patients. J Infect Dis. 2004;189:1679-83.
13. Wakefield AE, Miller RF, Guiver LA, Hopkin JM. Oropharyngeal samples for detection of Pneumocystis carinii by DNA amplification. Q J Med. 1993;86:401-6.
14. Matos O, Costa MC, Lundgren B, Caldeira L, Aguiar P, Antunes F. Effect of oral washes on the diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia with a low parasite burden and on detection of organisms in subclinical infections. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2001;20:573-5.
15. Atzori C, Agostoni F, Angeli E, Mainini A, Orlando G, Cargnel A. Combined use of blood and oropharyngeal samples for noninvasive diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia using the polymerase chain reaction. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1998;17:241-6.
16. De Oliveira A, Unnasch TR, Crothers K, Eiser S, Zucchi P, Moir J, et al. Performance of a molecular viability assay for the diagnosis of Pneumocystis pneumonia in HIV-infected patients. Diagn Microbiol Infect Dis. 2007;57:169-76.
17. Nevez G, Totet A, Pautard JC, Raccurt C. Pneumocystis carinii detection using nested-PCR in nasopharyngeal aspirates of immunocompetent infants with bronchiolitis. J Eukaryot Microbiol. 2001;Suppl:122S-3.
18. Ricaurte O, Caldas ML, López F, Gutiérrez L, Nicholls S, Castañeda E. Pneumocystis carinii. Bogotá: Instituto Nacional de Salud; 1992.
19. Correa LT, Durango GE, López E, Hurtado HE, Vélez LA. Evaluación de cuatro técnicas de coloración para el diagnóstico de neumonía por Pneumocystis jirovecii (carinii) en pacientes inmunocomprometidos. Infectio. 2004;8:99.
20. Muñoz CO, Tobón AM, Zuluaga A, Restrepo A, Cano LE, González A. Diagnóstico por PCR anidada de Pneumocystis jirovecii en muestras respiratorias de pacientes con neumonía, infectados con el VIH o sin infectar. Infectio. 2006;10:135-6.
21. Kahn FW, Jones JM. Analysis of bronchoalveolar lavage specimens from immunocompromised patients with a protocol applicable in the microbiology laboratory. J Clin Microbiol. 1988;26:1150-5.
22. Gosey LL, Howard RM, Witebsky FG, Ognibene FP, Wu TC, Gill VJ, et al. Advantages of a modified toluidine blue O stain and bronchoalveolar lavage for the diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia. J Clin Microbiol. 1985;22:803-7.
23. Landis JR, Koch GG. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics. 1977;33:159-74.
24. Cregan P, Yamamoto A, Lum A, van Der Heide T, MacDonald M, Pulliam L. Comparison of four methods for rapid detection of Pneumocystis carinii in respiratory specimens. J Clin Microbiol. 1990;28:2432-6.
25. Bedrossian CW, Mason MR, Gupta PK. Rapid cytologic diagnosis of Pneumocystis: A comparison of effective techniques. Semin Diagn Pathol. 1989;6:245-61.
26. Gal AA, Koss MN, Strigle S, Angritt P. Pneumocystis carinii infection in the acquired immune deficiency syndrome. Semin Diagn Pathol. 1989;6:287-99.
27. Grocott RG. A stain for fungi in tissue sections and smears using Gomori's methenamine-silver nitrate technic. Am J Clin Pathol. 1955;25:975-9.
28. Kim HK, Hughes WT. Comparison of methods for identification of Pneumocystis carinii in pulmonary aspirates. Am J Clin Pathol. 1973;60:462-6.
29. Bava AJ, Moreno D, Bellegarde E. Comparison of 3 tests for the diagnosis of pulmonary pneumocystosis in AIDS patients. Rev Argent Microbiol. 2005;37:150-2.
30. Kovacs JA, Ng VL, Masur H, Leoung G, Hadley WK, Evans G, et al. Diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia: Improved detection in sputum with use of monoclonal antibodies. N Engl J Med. 1988;318:589-93.
31. Caliendo AM, Hewitt PL, Allega JM, Keen A, Ruoff KL, Ferraro MJ. Performance of a PCR assay for detection of Pneumocystis carinii from respiratory specimens. J Clin Microbiol. 1998;36:979-82.
32. Lautenschlager I, Lyytikainen O, Jokipii L, Jokipii A, Maiche A, Ruutu T, et al. Immunodetection of Pneumocystis carinii in bronchoalveolar lavage specimens compared with methenamine silver stain. J Clin Microbiol. 1996;34:728-30.
33. Banoo S, Bell D, Bossuyt P, Herring A, Mabey D, Poole F, et al. Evaluation of diagnostic tests for infectious diseases: General principles. Nat Rev Microbiol. 2006;4 (Suppl.): S20-32.
34. Procop GW, Haddad S, Quinn J, Wilson ML, Henshaw NG, Reller LB, et al. Detection of Pneumocystis jiroveci in respiratory specimens by four staining methods. J Clin Microbiol. 2004;42:3333-5.
35. Aderaye G, Woldeamanuel Y, Asrat D, Lebbad M, Beser J, Worku A, et al. Evaluation of toluidine blue O staining for the diagnosis of Pneumocystis jiroveci in expectorated sputum sample and bronchoalveolar lavage from HIV-infected patients in a tertiary care referral center in Ethiopia. Infection. 2008;36:237-43.
36. Ng VL, Yajko DM, McPhaul LW, Gartner I, Byford B, Goodman CD, et al. Evaluation of an indirect fluorescent-antibody stain for detection of Pneumocystis carinii in respiratory specimens. J Clin Microbiol. 1990;28:975-9.
37. Manterola C, Pineda V. El valor de "p" y la "significación estadística". Aspectos generales y su valor en la práctica clínica. Rev Chil Cir. 2008;60:86-9.
38. Cushion MT, Beck JM. Summary of Pneumocystis research presented at the 7th International Workshop on Opportunistic Protists. J Eukaryot Microbiol. 2001;48(Suppl.):101S-5S.
39. Helweg-Larsen J. Pneumocystis jiroveci. Applied molecular microbiology, epidemiology and diagnosis. Dan Med Bull. 2004;51:251-73.
40. Witebsky FG, Andrews JW, Gill VJ, MacLowry JD. Modified toluidine blue O stain for Pneumocystis carinii: Further evaluation of some technical factors. J Clin Microbiol. 1988;26:774-5.
41. Pinlaor S, Mootsikapun P, Pinlaor P, Phunmanee A, Pipitgool V, Sithithaworn P, et al. PCR diagnosis of Pneumocystis carinii on sputum and bronchoalveolar lavage samples in immuno-compromised patients. Parasitol Res. 2004;94:213-8.
42. Stratton N, Hryniewicki J, Aarnaes SL, Tan G, de la Maza LM, Peterson EM. Comparison of monoclonal antibody and calcofluor white stains for the detection of Pneumocystis carinii from respiratory specimens. J Clin Microbiol. 1991;29:645-7.
43. Aliouat-Denis CM, Martinez A, Aliouat el M, Pottier M, Gantois N, Dei-Cas E. The Pneumocystis life cycle. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2009;104:419-26.
44. Gill VJ, Evans G, Stock F, Parrillo JE, Masur H, Kovacs JA. Detection of Pneumocystis carinii by fluorescent-antibody stain using a combination of three monoclonal antibodies. J Clin Microbiol. 1987;25:1837-40.
45. Gracia JD, Miravitlles M, Mayordomo C, Ferrer A, Álvarez A, Bravo C, et al. Empiric treatments impair the diagnostic yield of BAL in HIV-positive patients. Chest. 1997;111:1180-6.
Cómo citar
1.
Rodiño J, Rincón N, Aguilar YA, Rueda ZV, Herrera M, Vélez LA. Diagnóstico microscópico de neumonía por Pneumocystis jirovecii en muestras de lavado broncoalveolar y lavado orofaríngeo de pacientes inmunocomprometidos con neumonía. biomedica [Internet]. 7 de marzo de 2011 [citado 19 de abril de 2024];31(2):222-31. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/307
Sección
Artículos originales

Métricas

Estadísticas de artículo
Vistas de resúmenes
Vistas de PDF
Descargas de PDF
Vistas de HTML
Otras vistas
QR Code