Estandarización de una prueba múltiple de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la identificación de Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum

Rubén E. Varela-M, Jinney Stefany Arias, Luz Elena Velásquez, .

Palabras clave: Angiostrongylus, Angiostrongylus cantonensis, reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa, reacción en cadena de la polimerasa multiplex

Resumen

Introducción. En el mundo, las angiostrongilosis de mayor impacto en salud humana y animal son ocasionadas por Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. En las personas, las formas clínicas son la meningitis eosinofílica y la angiostrongilosis abdominal, y, en los mamíferos cánidos, el daño cardiopulmonar. Se las consideran enfermedades emergentes debido a la propagación mundial del caracol africano Lissachatina fulica, un huésped intermediario de los parásitos. Los escasos métodos de identificación de Angiostrongylus spp. no son muy específicos ni sensibles y son costosos. Se necesita urgentemente una herramienta diagnóstica asequible, sensible y específica
para el manejo de las angiostrongilosis humana y la animal.
Objetivo. Desarrollar una prueba de PCR múltiple en tiempo real (qPCR) para identificar las tres especies patógenas de Angiostrongylus.
Materiales y métodos. Mediante un análisis bioinformático se seleccionó una secuencia del genoma ITS-2 de Angiostrongylus para garantizar la especificidad del cebador y las sondas. El ADN de los parásitos adultos (control positivo) y de las larvas se extrajo con el estuche DNeasyBlood & Tissue®.
Las reacciones de la PCR cuantitativa se ejecutaron en un termociclador Smartcycler Cepheid®, usando el estuche de mezcla maestra QuantiTect®. Como control negativo, se utilizó ADN humano, de otros parásitos y del caracol africano.
Resultados. Los valores del ciclo umbral para los controles positivos de ADN fueron: 21 para Angiostrongylus cantonensis, 22 para A. costaricensis y 31 para A. vasorum. En los controles negativos, el ciclo umbral fue cero. La qPCR mostró una eficiencia de amplificación de 2 (100 %).
Conclusiones. En el laboratorio se estandarizó una qPCR múltiple para tres especies clínicamente significativas de Angiostrongylus.

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  • Rubén E. Varela-M Unidad de Biología Molecular y Computacional, Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET), Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Santiago de Cali, Cali, Colombia
  • Jinney Stefany Arias Grupo de Microbiología Ambiental, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Luz Elena Velásquez Grupo de Microbiología Ambiental, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Unidad de Malacología Médica y Trematodos, Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET), Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

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Cómo citar
1.
Varela-M RE, Arias JS, Velásquez LE. Estandarización de una prueba múltiple de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la identificación de Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. biomedica [Internet]. 15 de marzo de 2018 [citado 29 de marzo de 2024];38(1):111-9. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3407
Publicado
2018-03-15
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