Curvas de fusión de regiones genómicas específicas: una herramienta prometedora para el diagnóstico y tipificación de las especies causantes de la leishmaniasis cutánea en Colombia

Johana Marin, Daniel Urrea, Carlos Muskus, María Clara Echeverry, Ana María Mejía, Omar Triana, .

Palabras clave: Leishmania, leishmania/diagnóstico, leishmaniasis cutánea, reacción en cadena de la polimerasa, Colombia

Resumen

Introducción. La leishmaniasis cutánea es una enfermedad causada por parásitos del género Leishmania que tiene gran incidencia en Colombia. El diagnóstico y la identificación de la especie infecciosa son factores críticos en el momento de escoger e iniciar el tratamiento. Actualmente, los métodos de diagnóstico y tipificación requieren procedimientos complejos, por lo que es necesario validar nuevos marcadores moleculares y métodos que simplifiquen el proceso.
Objetivo. Desarrollar una herramienta basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con curvas de fusión (High Resolution Melting; PCR-HRM) para el diagnóstico y tipificación de las tres especies de Leishmania de importancia epidemiológica en casos de leishmaniasis cutánea en Colombia.
Materiales y métodos. Los genomas de Leishmania panamensis, L. braziliensis y L. guyanensis se compararon mediante métodos bioinformáticos. Las regiones específicas de especie identificadas se validaron mediante PCR. Para los marcadores seleccionados se diseñó una PCR-HRM y se estimaron algunos parámetros de validez y seguridad usando aislamientos de pacientes colombianos caracterizados previamente mediante PCR y análisis de polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción (Restriction Fragment Length Polymorphism – RFLP; PCR-RFLP) del gen hsp70.
Resultados. El análisis genómico comparativo mostró 24 regiones específicas de especie. Sin embargo, la validación mediante PCR solo identificó un marcador específico para cada especie de Leishmania. Los otros marcadores mostraron amplificación cruzada. El límite de detección para los tres marcadores seleccionados fue de un parásito, mientras que la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el negativo fueron de 91,4, 100, 100 y 75 %, respectivamente.
Conclusiones. Las tres regiones seleccionadas pueden emplearse como marcadores moleculares en el diagnóstico y tipificación de las especies causantes de la leishmaniasis cutánea en Colombia.

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  • Johana Marin Biología y Control de Enfermedades Infecciosas, Universidad de Antioquía, Medellín, Colombia
  • Daniel Urrea Biología y Control de Enfermedades Infecciosas, Universidad de Antioquía, Medellín, Colombia Laboratorio de Investigaciones en Parasitología Tropical, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima, Ibagué, Colombia
  • Carlos Muskus Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales-PECET, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • María Clara Echeverry Departamento de Salud Pública, Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C., Colombia
  • Ana María Mejía Biología y Control de Enfermedades Infecciosas, Universidad de Antioquía, Medellín, Colombia
  • Omar Triana Biología y Control de Enfermedades Infecciosas, Universidad de Antioquía, Medellín, Colombia http://orcid.org/0000-0001-8031-0225

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Cómo citar
Marin, J., Urrea, D., Muskus, C., Echeverry, M. C., Mejía, A. M., & Triana, O. (2017). Curvas de fusión de regiones genómicas específicas: una herramienta prometedora para el diagnóstico y tipificación de las especies causantes de la leishmaniasis cutánea en Colombia. Biomédica, 37(4), 538-547. https://doi.org/10.7705/biomedica.v37i4.3634

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Publicado
2017-12-01
Sección
Artículos originales