Modelo de detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β mediante citometría de flujo

  • Juan Carlos Villa-Camacho Grupo de Ciencias Básicas Médicas, Facultad de Medicina, Universidad de los Andes, Bogotá, D.C., Colombia
  • Juan Camilo Vargas-Zambrano Grupo de Ciencias Básicas Médicas, Facultad de Medicina, Universidad de los Andes, Bogotá, D.C., Colombia
  • John Mario González Universidad de los Andes, Bogotá, D.C., Colombia
Palabras clave: neutralizantes, células K562, citometría de flujo, esclerosis múltiple, interferón beta.

Resumen

Introducción. El interferón beta (IFN-β) se usa para tratar la forma recaída-remisión de la esclerosis múltiple. Sin embargo, el uso de proteínas recombinantes como medicamentos puede generar la producción de anticuerpos, disminuyendo así la efectividad del tratamiento.

Objetivo. Estandarizar una técnica de detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β, mediante citometría de flujo.

Materiales y métodos. Se cultivaron dos líneas tumorales humanas (U937 y K562) con IFN-β1a humano recombinante y mediante citometría de flujo se determinó la expresión de la proteína ISG15 intracelular. Los sueros se obtuvieron de un conejo Nueva Zelanda antes y después de la inmunización con 100.000 UI de IFN-β1a en adyuvante de Freund. Para la detección de anticuerpos neutralizantes, se estimularon células K562 con IFN-β1a preincubado con sueros de conejos a una dilución 1:20. Después de 24 horas de incubación se determinó la expresión de la proteína ISG15.

Resultados. La expresión de ISG15 fue mayor en células K562 estimuladas. La intensidad media de fluorescencia para la ISG-15 entre células en ausencia IFN-β1a, mostró una mediana de 198 unidades arbitrarias (UA) (p25-75= 173-231 UA) y, en presencia de IFN-β1a, 430 UA (p25-75 =316-611,5), con una diferencia estadísticamente significativa (p=0,008). La presencia de anticuerpos anti-IFN-β1a en el suero del conejo inmunizado, hizo disminuir de forma acentuada la expresión de la ISG15 en células K562 cultivadas con IFN-β1a, en comparación con el control (mediana=3,040 UA Vs. 43,644 UA, respectivamente).

Conclusiones. Este trabajo muestra la detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β en conejos, utilizando la expresión de la proteína ISG15 por citometría de flujo.

 

doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v32i4.637

 

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Publicado
2012-12-01
Cómo citar
Villa-Camacho, J. C., Vargas-Zambrano, J. C., & González, J. M. (2012). Modelo de detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β mediante citometría de flujo. Biomédica, 32(4), 617-22. https://doi.org/10.7705/biomedica.v32i4.637
Sección
Nota técnica