TY - JOUR AU - Mateus, Jose AU - Lasso, Paola AU - González, John Mario AU - Puerta, Concepción Judith AU - Cuéllar, Adriana PY - 2013/12/01 Y2 - 2024/03/29 TI - Diseño de un panel multicolor para evaluar moléculas intracelulares y de superficie mediante citometría de flujo JF - Biomédica JA - biomedica VL - 33 IS - 4 SE - Nota técnica DO - 10.7705/biomedica.v33i4.1709 UR - https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/1709 SP - 660-72 AB - <p><strong>Introducción.</strong> La citometría de flujo permite detectar la presencia de moléculas intracelulares y de superficie, de forma simultánea sobre cada célula.</p><p><strong>Objetivo.</strong> Describir un método para la construcción armónica de un panel multicolor con 11 parámetros para el análisis fenotípico y funcional de linfocitos T (LT) CD8+ por citometría de flujo.</p><p><strong>Materiales y métodos.</strong> Para la construcción del panel multicolor, se seleccionaron las moléculas y se titularon los conjugados con fluorocromos para la determinación de CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27,<br />CD45RA, CD95 y CD127, en células mononucleares de sangre periférica. Para la evaluación del panel, se hizo la construcción progresiva adicionando uno a uno los conjugados y la fluorescencia menos uno (FMO). Este método fue aplicado para células <em>ex vivo</em> y para evaluar la producción de IFNγ, IL-2 y TNFα frente al estímulo con la enterotoxina B de<em> Staphylococcus aureus</em> (SEB) y al antígeno crudo de <em>Trypanosoma cruzi</em>. Finalmente, se procedió al análisis de las subpoblaciones de LT CD8+ <em>ex</em><br /><em>vivo</em> en individuos sanos.</p><p><strong>Resultados.</strong> La evaluación de las moléculas con los conjugados no mostró interferencia en las señales de fluorescencia. Las frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8+ evaluadas fueron cercanas a los valores reportados en otros estudios. Además, se observó que la frecuencia de LT CD8+ productores de IFNγ, IL-2 y TNFα fue mayor a las seis horas de cultivo con SEB y con el antígeno crudo de <em>T. cruzi</em>.</p><p><strong>Conclusiones.</strong> El método aplicado para la construcción del panel multicolor permite obtener frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8+ que corresponden a lo reportado en la literatura científica.</p><p> </p><p>doi: <a href="http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1709">http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1709</a></p><p> </p> ER -